Análise funcional do gene EGR3 e seus possíveis genes-alvo modulados em linhagem de câncer de mama BT-20 exposta ao análogo de curcumina NC2603

Abstract

O câncer de mama permanece como uma preocupação de saúde pública mundialmente importante devido às elevadas taxas de mortalidade e às limitações das terapias atuais, frequentemente comprometidas pela resistência adquirida das células tumorais, emergindo a necessidade de novos medicamentos que sejam seguros, acessíveis e eficazes. Nesse cenário, a curcumina vem sendo amplamente estudada e tem seus efeitos terapêuticos reconhecidos em várias doenças, sobretudo em diversos tipos de câncer. No entanto, sua baixa solubilidade aquosa e biodisponibilidade reduzida restringem sua aplicação clínica. A modificação de sua estrutura química e a síntese de análogos surgem, portanto, como estratégias visando componentes com melhores atividades biológicas. A partir da avaliação da atividade antitumoral de compostos análogos à curcumina em linhagens celulares de câncer de mama, observou-se a modulação da expressão de genes relacionados com a migração celular no transcriptoma da linhagem de câncer de mama triplo-negativo BT-20 na presença do análogo de curcumina NC2603 – EGR3, ATF3, EMP1, GADD45B, SOCS3 e ZFP36 –, sugerindo que o EGR3 desempenha um papel regulador na ativação dos demais genes. Sendo assim, o presente estudo buscou caracterizar funcionalmente o gene EGR3, sua relação com os possíveis genes-alvo e o seu envolvimento com a migração celular na linhagem BT-20 exposta à curcumina e ao análogo de curcumina NC2603. Para isso, foi determinado o valor de IC50 da curcumina (30,3 μM) e avaliou-se a modulação gênica após 24 h de tratamento por RT-qPCR, no qual todos os genes avaliados apresentaram indução significativamente maior após o tratamento com o análogo NC2603 em comparação com a curcumina. Adicionalmente, a tentativa de deleção do EGR3 foi conduzida utilizando o sistema CRISPR/Cas9, com um plasmídeo adquirido comercialmente, seguido de confirmação da transfecção pelo antibiótico de seleção puromicina (1 μg/mL), e visualização da fluorescência de GFP; contudo, a ausência de redução significativa do mRNA e da proteína indicou que o knockout não foi obtido. Como alternativa, foi utilizado dexametasona (1 μM) por 48 h como inibidor de EGR3, resultando em diminuição de sua expressão e confirmando a regulação negativa dos genes-alvo, exceto EMP1, na linhagem e no contexto observados. Apesar disso, a redução de EGR3 não foi associada a maior invasividade celular, deixando em aberto seu papel na migração celular. Em conjunto, tais achados apontam o NC2603 como um análogo promissor e destacam o EGR3 como um potencial alvo molecular na terapia do câncer de mama triplo-negativo, embora estudos adicionais sejam necessários para validar sua eficácia in vivo e aprofundar a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos.