Clone elite de Uncaria tomentosa com potencial atividade anti-inflamatória sobre células mononucleares do sangue humano

Abstract

A espécie medicinal Uncaria tomentosa apresenta evidência de atividade anti-inflamatória. No Brasil, está elencada na Rename (Relação Nacional de Medicamentos Essenciais) podendo ser amplamente disponibilizada pelo Sistema Único de Saúde (SUS). Porém, a coleta inadequada do material na natureza, tem promovido a erosão genética da espécie. A continuidade da utilização de U. tomentosa em escala industrial e a disponibilidade do fitoterápico para os pacientes pelo SUS depende da conservação desta espécie vulnerável à extinção. Como alternativa para conservação do recurso genético da espécie, foi selecionado de um banco de germoplasma in vitro, os clones UTBN207 e UTBN233. Para multiplicação dos clones mantidos a 25 ± 2 °C foi determinado a melhor condição de cultivo o meio de cultura WP contendo 10 g L-1 da fonte de carbono glicose e, para a manutenção dos indivíduos em sala de crescimento a 18 ± 2 °C constatou-se que o meio de cultura WP/2 suplementado com 10 g L-1 de sacarose é a melhor opção. Ademais, a conservação desses indivíduos imersos em óleo mineral, é possível e foi mostrada pela primeira vez em U. tomentosa. Os indivíduos sobreviveram durante 6 meses sem a troca do meio de cultura. A melhor condição encontrada foi utilizando-se o segmento nodal inserido com um par de folhas seccionadas em meio WP basal (100 mL L-1) suplementado com sacarose (20 g L-1) e acrescido de 15 mL de óleo mineral. A partir do desenvolvimento dos indivíduos de U. tomentosa, foram gerados extratos de todos os materiais advindo de micropropagação e da cultura de tecido vegetal, todos contendo os marcadores químicos, com a quantificação de isomitrafilina ao analisar o extrato de raízes provenientes da cultura de raízes UTBN233. Os extratos vegetais foram avaliados quanto à sua atividade imunológica, utilizando células mononucleares do sangue humano incubadas com a bactéria Escherichia coli enteropatogênica para analisar a fagocitose, a atividade microbicida e a produção de citocinas por citometria de fluxo. A fluorescência da laranja de acridina foi empregada para avaliar a viabilidade celular e a atividade funcional dos fagócitos. Todos os extratos foram também analisados em relação à citotoxicidade. O genótipo UTBN233 mostrou-se mais apropriado em termos de segurança quando ensaiado frente a monócitos humanos. Houve aumento no índice de fagocitose em 200 µg mL 1 no extrato de raízes de plantas UTBN233 e com elevada ação microbicida em 20 µg mL-1. As plantas micropropagadas do genótipo UTBN207 parecem estar associadas a um perfil pró-inflamatório, com níveis elevados de expressão de IL-6. O germoplasma vegetal do clone elite UTBN233 in vitro e seus extratos obtidos a partir dessa multiplicação exibe promissora ação para utilização na conservação da espécie e auxilia no desenvolvimento da produção de novos fitoterápicos obtidos de forma sustentável. Com o uso das ferramentas biotecnológicas foi possível a obtenção de resultados sólidos que permitem a reprodutibilidade das técnicas aplicadas para que a qualidade, segurança e eficácia dos extratos provenientes dos processos biotecnológicos propostos sejam plenamente alcançadas.