| dc.description.abstract | O osteossarcoma é o câncer ósseo mais comum e afeta principalmente crianças e adolescentes. Embora o surgimento das terapias multidrogas tenha melhorado o tratamento, aproximadamente 30% dos pacientes com osteossarcoma desenvolvem metástase. As chalconas, metabólitos da classe dos flavonoides, têm demonstrado diversas propriedades antitumorais. Em trabalho anterior foi identificado que a transChalcona inibe a expressão gênica da enzima topoisomerase 2A, que tem sua expressão regulada pelos fatores de transcrição p53 e Sp1, ambos alvos de drogas anticarcinogênicas. Deste modo, o objetivo do trabalho foi verificar se os efeitos da transChalcona, em células de osteossarcoma humano U2OS, estavam relacionados com a regulação dos fatores de transcrição p53 e Sp1, que são responsáveis por controlarem a transcrição de diversos genes envolvidos em processos celulares como: arrasto do ciclo celular, reparo do DNA e indução de apoptose. Após tratamento com trans-Chalcona, a viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio de MTT e a apoptose através de citometria de fluxo, coloração com DAPI e detecção da atividade de caspases. A expressão de Sp1 e p53 foi mensurada por Western Blot. A regulação transcricional e pós-traducional foram avaliadas por RT-PCR, ensaio da luciferase e experimentos com inibidores de proteossoma. O efeito da trans-Chalcona sobre o transcriptoma da linhagem U2OS foi avaliado por RNA-Seq. Identificou-se que o crescimento celular foi inibido pela transChalcona de forma dose e tempo dependente, com significante inibição a 10 µM após 48 horas de tratamento. A trans-Chalcona também induziu apoptose de forma dose dependente, aumentando o número de células apoptóticas em 1,9 e 3,6 vezes nas concentrações de 10 µM e 50 µM, respectivamente. Análises de Western Blot e RT-PCR indicaram que a trans-Chalcona reduziu Sp1 em nível transcricional e pós-traducional e aumentou a expressão de p53 em nível pós-traducional. Esses resultados foram confirmados pelo ensaio da luciferase de promotores Sp1, Top2A e MDM2, e por ensaio de degradação proteossomal. A análise de RNA-seq demonstrou que a trans-Chalcona modulou diversas vias importantes no desenvolvimento do câncer, tais como: as vias de apoptose, sinalização da p53 e WNT/catenina. Além disso, observou-se que a estabilização da proteína p53 e indução de apoptose promovida pela trans-Chalcona é mediada parcialmente pela indução da proteína Hsp40. Assim, identificou-se que a transChalcona inibe o crescimento celular e induz apoptose em células de osteossarcoma humano. Estes efeitos, pelo menos em parte, estão relacionados com a supressão da proteína oncogênica Sp1, indução do supressor de tumor p53 e regulação transcricional de diversos genes alvos de Sp1/p53. | pt_BR |
